仓鼠经口给予亚砷酸盐后血浆中砷结合蛋白的纯化
2．2HPLC-ICP-MS联用KW-803色谱柱鉴定仓鼠血浆中的砷结合蛋白本实验通过HPLC-ICP-MS技术与KW-803色谱柱联用测定了仓鼠血浆中的砷结合蛋白，砷结合蛋白分子量大约为40～50kD(图2A)。为了阐明砷结合蛋白中砷的化合物类型，收集了保留时间在15～18min的砷结合蛋白样本，加热变性后用H2O2氧化，用离子交换柱ES-502N分离检测。结果发现从蛋白分离出来的砷形态主要以MMAV存在，其次是DMAV和少量的iAsV。这表明这些砷化合物被H2O2氧化前主要以三价还原形态存在(图2B)。
2．3借助HPLC-ICP-MS技术，利用凝胶过滤柱和离子交换柱分离纯化仓鼠血浆中的砷结合蛋白本实验选择经口给予亚砷酸后第1天的仓鼠血浆作为整个实验的血浆来源。为了鉴定血浆中的砷结合蛋白，本实验利用2种不同的色谱柱凝胶过滤柱KW-803和离子交换柱ES-502N，结合三步法纯化血浆中的砷结合蛋白。
首先，用KW-803柱收集保留时间在15～18min的砷结合蛋白馏分(图3A)，在280nm处紫外吸收检测洗脱的蛋白(虚线);其次，利用离子交换柱用1，3-二氨基丙烷浓度梯度将这些收集的砷结合蛋白样品进一步分离，紫外吸收度显示，砷结合蛋白可从其他杂蛋白例如非砷结合蛋白等(assenicunboundproteins)中分离出来(图3B)。然后在此基础上，将ES-520色谱柱保留时间为19～21min的砷结合蛋白馏分用KW-803色谱柱分离(图3C)。每一个步骤所得的馏分样品进行蛋白定量，用于SDS-PAGE分析。
2．4SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白片段每一步纯化的馏分用SDS-PAGE(10%聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析，图4示随着纯化步骤的进行，蛋白条带显著增加，并检测到相应分子量为47kD，与色谱法结果一致。提示结合IC-PMS可以有效的追踪砷，凝胶过滤柱和阴离子交换柱对于快速纯化砷结合蛋白很有帮助。