仓鼠经口给予亚砷酸盐后血浆中砷结合蛋白的纯化
2019-08-16 10:39:53 点击：
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3讨论
近年研究表明，砷中毒诱导的癌症通常与长期暴露于iAsⅢ有关，砷的中间代谢产物如MMAⅢ和DMAⅢ参与和介导了砷的毒性及致癌过程［15-18］。
Kala等［19］报道，大鼠暴露于iAsⅢ后通过ESI-MS技术能准确地鉴定出大鼠胆汁中砷化合物的形态，并发现，在胆汁中砷化合物以三价与谷胱甘肽共轭体形式存在，表明三价砷化合物对半胱氨酸残基有高度亲和性。体外和体内实验支持三价砷化合物有很高的蛋白亲和性，其可抑制硫氧还蛋白还原酶、硫氧还蛋白过氧化物酶和丙酮酸脱氢酶［7-9］等一些关键酶，三价砷化合物和这些蛋白的巯基相互作用是发挥毒性的一个可能机制［9，14］。事实上，许多研究者已利用在不同的细胞系上砷亲和树脂，如苯砷-琼脂糖(PAO-琼脂糖)鉴定特定的砷结合蛋白。然而，涉及到砷处理的细胞或组织中直接分离砷结合蛋白的研究信息很少。因此，有必要发展更加简单快速的方法分离砷处理样本中的砷结合蛋白。
有研究表明，仓鼠体内砷的分布和排泄与人类更相似，而且这两种物种比大鼠更容易受到砷的危害［2，20］。本研究发现，仓鼠在iAsⅢ中暴露的第1天，就能在血浆中检测到砷结合蛋白，第3天显著下降(图1)。为分离仓鼠血浆中的砷结合蛋白，本实验采用2种不同的HPLC色谱柱，体积排阻柱和阴离子交换柱(图2)，根据洗脱结果，仓鼠血浆中的砷结合蛋白分子量约为40～50kD。在此基础上，本研究利用IC-PMS追踪砷，并对砷结合蛋白保留时间结合2种相对应的柱子进行蛋白质组分分馏(图3A-C)。另外，本研究借助浓度梯度方法，对砷结合蛋白馏分样品进行了分离，发现随着1，3-二氨基丙烷的浓度的增加，砷结合蛋白可以从其它杂蛋白中分离出来，但砷的峰高明显比体积排阻柱得到的砷结合蛋白峰值低。