仓鼠经口给予亚砷酸盐后血浆中砷结合蛋白的纯化
1材料和方法
1．1试剂盐酸氨基丁三醇、氨基丁三醇和1，3-二氨基丙烷购买于Sigma(St．Louis，MO，USA);30%过氧化氢、氯化氢、醋酸铵、醋酸、28%氨水溶液、亚砷酸钠和二甲基砷酸购于和光纯药(大阪，日本);单甲基砷酸(MMAV)从三化学品(山梨，日本)获得。ICP-MS的砷标准液购于SPEXCentiPrep(Metuchen，NJ，USA)。砷化合物的储备液(10mol)从各自标准化合物中提取制备，储放在阴暗4℃处。标准液的稀释液在每次使用前配制。
1．2HPLC-ICP-MS分析HPLC系统由PU-610液相色谱仪溶剂输送泵和DG660B-2脱气器(GLSciencesCo．，Tokyo，Japan)组成。GS-220HQ和ProteinKW-8037G色谱柱(排阻范围分别为3kD和170kD)用于分离低分子和高分子成分(GS-220HQ和ProteinKW-8037G，色谱柱)。将20μl或200μl的等量样品注入色谱柱，分别用50mmol/L乙酸铵缓冲液或50mmol/LTris-HNO3缓冲液(pH7．4，25℃)以0．6ml/min的流速进行冲洗。阴离子交换柱ES-520N7C(ShodexAsahipak)用20～200mmol/L的1，3-二氨基丙烷缓冲液(pH9.0，25℃)，以1.0ml/min的速度冲洗，用100μl等量样本溶液加入柱中。安捷伦HP7500ICPMSYokogawaAnalyticalSystems，Hachiouji，Japan)联合1．0ml/minD2气体流的八极反应体系监测冲洗的亚砷酸，防止40Ar和35Cl+(信号在m/z77)的分子干涉。
1．3动物实验动物实验均遵循“动物实验原则”(NIH版，1996年修订本)，并在浙江大学中国动物调查委员会的指导下进行。7周龄雄性仓鼠，在以12h为明暗周期，室内温度保持在22℃～25℃饲养，自由饮食。1周适应期后，将体重为110～150g的仓鼠分配到实验组(n=3)。用蒸馏水配制质量浓度为0．5mg/ml砷的亚砷酸溶液，以每公斤体重0．5mg砷给予8周龄仓鼠口服，分别于1、3、5d后将仓鼠处死。对照组(n=3)给予与实验组等量的蒸馏水，其它实验条件与实验组相同。